جهش دریکی از ۷ ژن
۳-۵ روش شناسی تحقیق
بررسی پرونده های بالینی موجود و شناسایی خانواده ها بر اساس معیار زیر:
انتخاب ۱۰۰ خانواده با حداقل ۲ فرد مبتلا و ۱ خواهر یا برادر سالم
انجام آزمایشات بالینی (انواع تست های شنوایی ودیگر بررسی های بالینی) برای تشخیص ناشنوایی غیر سندرمی و همچنین بررسی اودیوگرام برای تمامی مبتلایان الزامی می باشد.
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))
توضیح در مورد هدف از اجرای طرح و اخذ رضایت نامه از بیمارو یا والدین.
نمونه گیری خون از والدین، فرزندان سالم و مبتلایان
استخراج DNA مطابق پروتکل استاندارد (Salting out)
انتخاب حداقل ۳ مارکر پلی مورفیک برای هر لوکوس
پس از انتخاب مارکرها ، پرایمرهای مربوط به آنها نیز از سایت های بیو انفورماتیکی جهت سفارش آماده شد.
تعیین هتروزیگوسیتی برای مارکرها توسط نمونه های نرمال
آنالیز پیوستگی با بهره گرفتن از PCR و الکتروفورز برروی ژل ۱۶-۸% پلی آکریل آمید برای تفکیک بالاتر و سپس رنگ آمیزی با نیترات نقره
انجام آنالیز پیوستگی در هر خانواده برای هفت ژن(SERPINB6, SLITRK6, OTOGL, GJC3, CABP2, GJB4, NESP4) در ارتباط با ناشنوایی اتوزومی مغلوب و سپس انجام توالی یابی جهت شناسایی جهش مورد نظر
جمع آوری داده ها و تجزیه و تحلیل آن ها از طریق برنامه های codon code و gene runner.
Codon code برنامه ای است که نتایج sequencing را با الگو مرجع[۵۲] مقایسه و بررسی می کند. از طریق برنامه gene runner تاثیرات تغییرات نوکلوتیدی را روی توالی اسید آمینه می توان بررسی کرد.
۳-۶ ملاحظات اخلاقی
با توجه به اینکه کلیه طرح های مرکز تحقیقات ژنتیک در کمیته اخلاقی پژوهشی دانشگاه به تصویب رسیده است، این پروژه بر اساس گرفتن فرم رضایت نامه و رعایت کلیه موازین اخلاقی اجرا می گردد. در هنگام مطالعه به فرد مورد آزمایش شرح و توضیح کافی در مورد تحقیق و فوائد نتایج آن داده شد و همچنین در پایان نتایج در زمینه وضعیت ناقلی فرد بصورت کتبی به وی داده و مشاوره جهت غربالگری های بعدی در اعضاء دیگر خانواده به وی ارائه گردید.
۳-۷ مواد و روش ها
۳-۷-۱ استخراج DNA
مواد لازم جهت استخراج DNA به روش نمک اشباع[۵۳] در جدول ۳-۲ خلاصه شده است:
جدول ۳-۲ مواد لازم جهت استخراج DNA به روش نمک اشباع
مواد
نحوه ساخت مواد
کلرید سدیم اشباع
۲/۲۹۲گرم از کلرید سدیم را با آب مقطر به حجم ۱۰۰۰میلی لیتر می رسانیم .
ایزوپروپانول ۱۰۰%
-
اتانول ۷۰% سرد
-
بافر TE
+ Tris – base (10mM)
EDTA(1mM)
